1.范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了甲胺磷等有機(jī)磷和克百威等氨基甲酸醋類農(nóng)藥在蔬菜中的殘毒快速檢測(cè)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于葉菜類(除韭菜)、果菜類、豆菜類、瓜菜類、根菜類(除胡蘿 卜、菱白等)中甲胺磷、氧化 樂果、對(duì)硫磷、甲拌磷、久效磷、倍硫磷、殺撲磷、敵敵畏、克百威、涕滅威、滅多威、抗蚜威、丁硫克百威、甲 蔡威、丙硫克百威、速滅威、殘殺威、異丙威等的農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)

2 原理

    有機(jī)磷和氨基甲酸醋類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酞膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酞膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲中毒致死，根據(jù)這一昆蟲毒理學(xué)原理，用在對(duì)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)中。加人反應(yīng)試劑后，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，判斷蔬菜中含有機(jī)磷

或氨基甲酸酷類農(nóng)藥的殘毒情況。即:
乙酞膽堿醋酶+有機(jī)磷或氨基甲酸醋類農(nóng)藥一 酶活性被抑制活性被抑制一 樣本中含有機(jī)磷或氨基甲酸醋類農(nóng)藥乙酞膽堿醋酶+樣本提取液 活性正常一 樣本中不含有機(jī)磷或氨墓甲酸酷類農(nóng)藥如以乙酞硫代膽堿(AsCh)為底物，在乙酞膽堿酷酶(AChE)的作用下乙酞硫代膽堿(AsCh)水解成硫代膽堿和乙酸，硫代膽堿和二硫雙對(duì)硝基苯甲酸(DTNB)產(chǎn)生顯色反應(yīng)，使反應(yīng)液呈黃色，在分光光度410nm處有**吸收峰，用分光光度計(jì)可測(cè)得酶活性被抑制程度(用抑制率表示)。
3 試劑 pH8磷酸緩沖液。
4丁酞膽堿醋酶:根據(jù)酶活性情況按要求用緩沖液溶解，AA值控制在0.4-0.8之間
5 底物:碘化硫代丁酞膽堿(s-butyrylthiocholineiodide，即BTCD，用緩沖液溶解。

6顯色劑:二硫代二硝基苯甲酸5〔,5-dithiobis(nitrobenzoicacid，即DTNB)，用緩沖液溶解

7 儀器了波長(zhǎng)為4工。nm士3nn)專用速測(cè)儀，或可見光分光光度計(jì)。
中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部2001一06-01批準(zhǔn)                                          2001門0一01實(shí)施

8微型樣品混合器
9臺(tái)式培養(yǎng)箱
10可調(diào)移液槍:(10^1001,L,1-5ml)
概不銹鋼取樣器(內(nèi)徑2cm),
11 配套玻璃儀器及其他配件等。
12 檢測(cè)門取樣用不銹鋼管取樣器取來自不同植株葉片(至少8^10片葉子)的樣本;果菜從表皮至果肉1- 1.5cm處取樣。
檢測(cè)過程
取2g切碎的樣本(非葉菜類取4g),放人提取瓶?jī)?nèi)，加人20mL緩沖液，震蕩1^-2min，倒出提取
液，靜止3^-5min;于小試管內(nèi)分別加人50IL酶,3mL樣本提取液，50pL顯色劑，于37-38C下放置
30min后再分別加人50ML底物，倒人比色杯中，用儀器進(jìn)行測(cè)定。

檢測(cè)結(jié)果計(jì)算
檢測(cè)結(jié)果按式((1)計(jì)算:

式中:AA— 對(duì)照組3min后與3min前吸光值之差;

     AA,— 樣本3min后與3min前吸光值之差。
抑制率)70%時(shí)，蔬菜中含有某種有機(jī)磷或氨基甲酸酷類農(nóng)藥殘毒。此時(shí)樣本要有2次以上重復(fù)檢

測(cè)，幾次重復(fù)檢測(cè)的重現(xiàn)性應(yīng)在80%以上

6最低檢出濃度